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粉尘螨Der f 4 变应原的提纯 及其淀粉酶活性分析3
2013-11-28 10:58:45 益择发布
谢建云3 3 温廷桓
上海医科大学医学螨类研究室 上海 200032
提要 目的: 采用上海医科大学(SMU ) 医学螨类研究室培养的粉尘螨(D erm atop hag oid esf arinae) 提纯粉尘螨4 类变应原(Der f 4) , 并对其作淀粉酶活性分析。方法: 首次运用20% - 50%饱和硫酸铵分级沉淀、Sephadex G2150 与G250 凝胶层析、聚丙烯酰胺凝胶制备电泳(PA GE) 等方法相结合, 系列分离纯化粉尘螨代谢培养基(Dff) 中的Der f 4。提纯过程中每步都作蛋白质含量测定, 并作淀粉酶活性分析。对纯化的Der f 4 进行理化性质的鉴定。结果: (1) 从Dff 经系列分离纯化粉尘螨代谢培养基获得SMU 2Der f 4, 最终得率为0. 98%; (2) 淀粉酶的比活性从0. 09U öm g 增加至4. 61 U öm g, 淀粉酶的纯化倍数为51. 2 倍, 得率为43. 1%; (3) 在SDS2PA GE 电泳上只显示一条蛋白质条带, 分子量MW 58 kDa; (4) 在等电聚焦电泳( IEF) 上显示多个蛋白质条带, 呈异质性,等电点p I 5. 18—7. 20。结论: SMU 2Der f 4 有淀粉酶活性, 其理化性状符合Der f 4 的特性。改用分离一般蛋白质常用的方法提取Der f 4 得率较国外报道的糖原2淀粉酶乙醇沉淀法为高。
关键词 粉尘螨 变应原 Der f 4 提纯 淀粉酶活性
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